夏天到了，您做好預(yù)防細胞污染了嗎？

發(fā)布時間： 2022-06-17　　點擊次數(shù)： 2572次

注意事項：

夏天到了，天氣炎熱，空氣中的溫度濕度都在上升，這時最易滋生細菌等微生物，導(dǎo)致細胞培養(yǎng)過程會沒有那么的順利，總是被污染，而且微生物繁殖的速度非常快。今天我們就來說道說道細胞污染應(yīng)該怎么預(yù)防、處理。

目前細胞污染大致可分為：細菌、真菌、支原體、黑膠蟲、病毒等污染。那么想要解決問題，我們就需要知道細胞是遭受了何種污染，才可對癥下藥。接下來我們將帶領(lǐng)大家逐步分析這些污染。

細菌

細菌污染時，培養(yǎng)基在短時間內(nèi)變成黃色或白色渾濁，有時稍加震蕩，便會有很多混濁物漂起。有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細胞形態(tài)會變異（出現(xiàn)多角，多核狀況）、細胞不附著。

細菌屬于原核生物，比細胞小很多，在顯微鏡下或成黑色細沙狀，或背景有大量黑點。可能造成細胞增殖緩慢或形態(tài)上的改變（多角、多核等），細胞質(zhì)中產(chǎn)生空泡、細胞不附著。

如遇細菌污染，我們可以如何處理呢？

合理使用相應(yīng)抗生素可殺滅細菌：

抗生素	作用對象	使用比例	儲存條件
卡那霉素溶液	細菌（如G+、G-）、支原體	稀釋:1:100	-20oC
硫酸慶大霉素溶液	細菌（如G+、G-）、支原體	稀釋: 1:1000	AMB室溫(15-30℃)
青鏈雙抗	細菌（如G+、G-）	稀釋: 1:100	-20oC
青鏈雙抗，10濃縮液	細菌（如G+、G-）	稀釋: 1:1000	-20oC
青鏈霉素，制霉菌素三抗	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC
青鏈霉素，兩性霉素素B三抗	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC
青鏈霉素，新霉素三抗	細菌（如G+、G-）	稀釋: 1:100	-20oC

真菌

真菌指的是類似棉絮狀的漂浮物，真菌是真核生物，比細胞大。在顯微鏡下可觀察到菌絲體，真菌有菌絲體，呈絲狀、管狀、樹狀、串珠狀。真菌一般呈菌落聚集生長。污染早期不會使培養(yǎng)基變黃。

細胞被真菌污染后，仍可生長，長時間細胞的活力狀態(tài)會變差，梅雨季時的污染率會提高。

真菌的種類也比較多：酵母菌、念珠菌、霉菌（青霉菌、根霉菌、曲霉）、蕈菌等。這些菌類都有各自的特點，很容易區(qū)分。

酵母菌：成串的卵狀物，體積為細胞的1/5~1/10倍，可由出芽生殖時的一大一小連體結(jié)構(gòu)識別，污染嚴重時會造成培養(yǎng)基pH值改變，不易去除。

念珠菌：卵圓狀，在細胞周邊生長。

霉菌：霉菌在我們的生活中無處不在，它比較青睞于溫暖潮濕的環(huán)境，一有合適的環(huán)境就會大量的繁殖，有綠色，毛茸茸的青霉菌，還有像樹根一樣根霉菌。

如果發(fā)現(xiàn)真菌污染，我們?nèi)绾芜M行處理呢？

合理使用相對應(yīng)的抗生素，可有效殺滅真菌污染：

抗生素	作用對象	使用比例	儲存條件
兩性霉素素B	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000	-20oC
制霉菌素	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋:1:100 ~ 1:1000	-20oC
青鏈霉素，制霉菌素三抗	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC
青鏈霉素，兩性霉素素B三抗	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC

支原體

支原體常來源于實驗人員（支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道）、動物源血清及胰酶、消毒不*的器具，體積只有0.15~0.3μm，所以能通過一般培養(yǎng)基0.2μm過濾膜進入培養(yǎng)基體系，培養(yǎng)基不會變黃，所以污染時不容易用常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)，光學(xué)顯微鏡難以辨識。

支原體革蘭染色為陰性，大部分支原體繁殖速度比細菌慢，對青霉素類的抗生素不敏感。污染不但會緩慢的改變細胞形態(tài)（拉絲、鋪展）、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應(yīng)，它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR或Western Blot結(jié)果偏差。

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）的使用方法：

加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細胞在混合液中培養(yǎng)4天，期間可用含 BIOMYC-1 的新培養(yǎng)基對細胞進行傳代；
4天后，加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng)3天，期間可進行傳代。
以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次處理周期。
每過一個周期，細胞需要做支原體污染檢測，以確認效果，從而適當減少實驗過程。

方案二：BIOMYC-3（03-038）的使用方法：

加1ml BIOMYC-3至100ml培養(yǎng)基中；
持續(xù)培養(yǎng)14天，期間可進行傳代;
以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次處理周期。
每過一個周期，細胞需要做支原體污染檢測，以確認效果，從而適當減少實驗過程。

提示

支原體殺除試劑對實驗幾乎沒有影響，可進行細胞實驗；如果客戶使用其中一種方案，不能清除支原體，說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內(nèi)；最佳方案是先用方案一處理一周期，再用方案二處理一周期，然后做支原體檢測。

黑膠蟲

目前科學(xué)界對黑膠蟲并無定論，認為是不明沉淀現(xiàn)象或多種未知生物污染現(xiàn)象的通稱。

黑膠蟲不是一個新的物種，是大家對顯微鏡下會活躍游動或原代打轉(zhuǎn)、顫動的未經(jīng)測序鑒定的微生物的別稱。因為多呈黑點的游動，被大家稱為“黑膠蟲"。實際上，它不是蟲子，經(jīng)過我們對多個客戶提供的黑膠蟲樣本測序，發(fā)現(xiàn)實際上它是各種細菌。大多數(shù)細菌都有鞭毛，這也就不難理解，它為啥會像蟲子一樣游動或原地打轉(zhuǎn)，顫動。

在高倍率顯微鏡頭下，可觀察到各式形狀的小黑點（卵圓狀、球狀、桿狀等）、活躍的布朗運動及明顯游動現(xiàn)象。

復(fù)蘇或傳代時往往會出現(xiàn)黑膠蟲污染，并且與細胞呈現(xiàn)此消彼長的現(xiàn)象，部分黑膠蟲具有細胞毒性，可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡，培養(yǎng)基不渾濁。

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：

加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細胞在混合液中培養(yǎng) 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養(yǎng)基；
4天后，加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng) 3 天；
以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次如上處理循環(huán)。

方案二：BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：

加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養(yǎng)基中；
持續(xù)培養(yǎng)14天，期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基;
以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次如上處理循環(huán)。
在處理過程中，細胞需要做支原體污染檢測，以確認效果，從而適當減少實驗過程。

以上污染與實驗室環(huán)境，溫度濕度等都有較大的關(guān)系，因此細胞房我們也需要提前做好預(yù)防。

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